Biotium Evagreen qPCR荧光染料
适于qPCR 和 HRM 最佳（没有之一）荧光染料
图 1. EvaGreen® dye binds to dsDNA via a “release-on-demand” mechanism.
图3. 比较Biotium公司的 Fast EvaGreen master mix (green)和 A公司 (blue) 和 Q公司 (red)fast SYBR Green master mixes, 显示相比 SYBR Green，EvaGreen 有着超级灵明度。
（ A fragment of ATPG was amplified from varying amounts of human genomic DNA (200 ng to 20 pg) using an ABI 7900 Fast thermocycler.）
图2. EvaGreen无毒，无致突变性，对水生生物无危害性。
第二， EvaGreen 的稳定性极好。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反， SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强 。
EvaGreen 降低了细胞膜透性，因而比 SYBR Green 1 更加安全。独立实验室的测试结果显示， EvaGreen 既没有诱变性也没有细胞毒性 。相反，虽然 SYBR Green I 本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制，使其有诱变增强作用 。考虑到 PCR 的广泛使用，其安全性应该得到足够重视。
EvaGreen 是一种用于实时定量 PCR （ qPCR ）的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I 。除了有相似的光谱特性， EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I 。
首先， EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I 。因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时， EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号（图 3）。较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 4 ）。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I 对 PCR 的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。
图 4 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析可以明显的区分三个不同的基因型：突变型（红色）、杂合型（紫色）和野生型（蓝色）。（数据由 Corbett Research 提供）
图 5 . EvaGreen 在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱
特性:
极高的灵敏度
- 在推荐浓度下使用时可以获得最强的 PCR 扩增信号。
PCR 抑制性极小
- 智能化的“按要求释放” DNA 结合技术使得 EvaGreen 对 PCR 的抑制远小于 SYBR Green I 。
和快速 PCR 兼容
- 对 PCR 干扰极小，从而极大的缩短了 PCR 延伸时间。
非常适合 HRM 分析
- 无“染料重分布”缺陷，兼容 PCR 后的高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析。
兼容多重 PCR
- 在推荐浓度下使用时，无扩增子之间的染料迁移现象。
超强稳定性
- 在大部分生化条件下非常稳定，可在室温下储存并可反复冻融。
安全性好
- 图6 细胞膜穿透性测试表明，EvaGreen几乎不能穿透细胞膜，安全性高
优越的兼容性
- 和 SYBR GREEN I 光谱相似,和各知名品牌的 qPCR 仪器兼容。 用 EvaGreen 替代 SYBR Green 1 ，毋须改变任何您目前使用的操作步骤和仪器设备。
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