藻胆蛋白Phycobiliproteins [R-藻红蛋白（R-PE）和别藻蓝蛋白（APC）]是用生物学检测的超灵敏荧光染料。它们比传统的有机荧光团灵敏度高100倍以上。即使在诸如流式细胞术和免疫测定的实际应用中，藻胆蛋白缀合的抗体的灵敏度通常远大于相应的有机分子缀合物的灵敏度。 藻胆蛋白是最亮的荧光标记，具有多个位点，可与许多生物和合成材料形成稳定的结合。与化学合成荧光染料相比，藻胆蛋白由于其相对高的荧光量子产率和消光系数而发出强烈的荧光信号。因为它们的荧光不会被生物分子猝灭，所以藻胆蛋白可以在许多应用发挥很大的作用。藻胆蛋白与生物分子（例如免疫球蛋白，蛋白A或链霉抗生物素蛋白）缀合，已经在流式细胞术，荧光激活细胞分选（FACS），免疫荧光成像和有限程度的活性氧物种检测中取得了巨大成功，目前市面上最主要的两种的藻胆蛋白是的R藻红蛋白（RPE）和别藻蓝蛋白（APC）。

 

 

 

藻红蛋白 (PE)

 

藻红蛋白 (PE) 是一种从红藻中分离出来分子量为240kDa的藻胆蛋白。它呈现出强烈的橙黄色荧光（比荧光素亮约25倍），摩尔消光系数为1,960,000cm-1M-1荧光量子产率为0.84。在天然状态下PE的吸收光谱有三个特征吸收峰，在565nm处有一个最大吸收峰，在496nm和545nm处有两个二级吸收峰，在574nm处有最大发射值。这三个吸收峰提高了PE与配备蓝色(488nm)、绿色(532nm)和黄色激光器(561-568nm)的成像仪器的兼容性。在使用PE之前，它必须首先与具有生物特异性的分子偶联，例如抗体或链霉亲和素等。PE和PE偶联物通常用于流式细胞术、荧光芯片和ELISA。由于其快速的光漂白特性PE在免疫荧光显微镜中的用途有限。

 

 

 

PE的优势

· 长波长发射曲线可最大限度地减少生物材料自发荧光的干扰

· 藻胆素与蛋白质骨架的共价结合使荧光猝灭的影响最小

· 极高的水溶性便于进行化学偶联反应

· 较大的斯托克位移，可用于多色发射光谱的分析

· 多个位点可与合成的有机化合物（如抗体、CY染料或AF染料）稳定结合

· 偶联物可用于多色流式细胞术，可使用单个激发光产生多个发射信号

 

 

表1.PE概览 

 

性质	值
适配激光器	488nm|532nm|561-568nm
吸收值（nm）	564nm
发射值（nm）	574nm
过滤器	TRITC
ε¹	1,960,000(cm-1M-1)
Φ²	0.84

 

1. ε=最大吸收波长处的摩尔消光系数。
2. Φ=水性缓冲液(pH7.2)中的荧光量子产率。

 

 

藻红蛋白产品

我们提供多类的PE产品，包括CD抗体、二抗、链霉亲和素偶联物、标记试剂盒、PE串联染料等。为了快速的用PE标记抗体和其他蛋白质，请使用不含硫酸铵缓冲液的冻干PE。硫酸铵的去除消除了繁琐的蛋白质纯化过程（例如透析），从而实现快速简便的标记偶联。我们还提供PE串联染料，用于使用单一激发光源的多色流式细胞术。

•       · 用于白细胞群和亚群免疫表型分析的CD抗体偶联物
•       · 二抗偶联物
•       · 链霉亲和素偶联物
•       · 用于蛋白质标记的PE和串联染料 
•       · PE和串联染料抗体标记试剂盒 

 

 

 

 

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• 别藻蓝蛋白(APC)

   

  别藻蓝蛋白(APC)是一种105kDa的藻胆蛋白，存在于蓝细菌和蓝藻中。它呈现出明亮的红色荧光，摩尔消光系数为700,000cm-1M-1荧光量子产率为0.68。与具有较大消光系数和量子产率的PE相比，APC没有那么明亮。天然状态下APC的荧光光谱以两个吸收峰为特征，一个在651nm处的主要吸收峰和一个在625nm处的次要吸收峰，以及在660nm处的单个发射最大峰。这种双重吸收最大值提高了与配备红色激光(633-647nm)成像仪器的兼容性。与PE一样，APC在使用前必须先与具有生物特异性的分子偶联，例如抗体和链霉亲和素等。APC偶联物经常用于流式细胞术、荧光芯片和ELISA，由于其快速的光漂白特性，在免疫荧光显微镜中的用途有限。
   

  APC的优势

•       · 长波长发射曲线可最大限度地减少生物材料自发荧光的干扰
•       · 藻胆素与蛋白质骨架的共价结合使荧光猝灭的影响最小
•       · 极高的水溶性便于进行化学偶联反应
•       · 较大的斯托克位移，可用于多色发射光谱的分析
•       · 多个位点可与合成的有机化合物（如抗体、CY染料或AF染料）稳定结合
•       · 偶联物可用于多色流式细胞术，可使用单个激发光产生多个发射信号

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  表2.APC概览

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  性质	值
  适配激光器	633-647nm
  吸收值（nm）	651nm
  发射值（nm）	660nm
  过滤器	Cy5
  ε¹	700,000(cm-1M-1)
  Φ²	0.68

• ε=最大吸收波长处的摩尔消光系数。
• Φ=水性缓冲液(pH7.2)中的荧光量子产率。

 

 

别藻蓝蛋白产品

我们提供多类的APC产品，包括CD抗体、二抗、链霉亲和素偶联物、标记试剂盒、APC串联染料等。为了快速的用APC标记抗体和其他蛋白质，请使用不含硫酸铵缓冲液的冻干APC。硫酸铵的去除消除了繁琐的蛋白质纯化过程（例如透析），从而实现快速简便的标记偶联。我们还提供APC串联染料，用于使用单一激发光源的多色流式细胞术。

•       · 用于白细胞群和亚群免疫表型分析的CD抗体偶联物
•       · 二抗偶联物
•       · 链霉亲和素偶联物
•       · 用于蛋白质标记的APC和串联染料
•       · APC和串联染料抗体标记试剂盒

 

 

 

 

 

 

PE和APC串联染料

PE和APC串联染料是由两个不同的荧光团共价连接组成，一个供体（例如R-PE或APC）和一个发射更长波长的荧光受体（例如Cy5®、Cy7®或iFluor™647）。在这种构象中，一个荧光团（称为“供体”）的激发导致能量转移到另一个荧光团（称为“受体”）并发出荧光。这种从供体到受体的能量转移是通过福斯特共振能量转移或FRET发生的。在流式细胞术中，串联染料非常适合用于细胞的多色参数分析，因为它们只需要单个激发光源和有着更大的斯托克斯位移。如图：FITC、PE、PE-Cy5®和PE-Cy7®无需荧光补偿即可对细胞进行四色分析。四种荧光团都被488nm氩离子激光有效地同时激发。

 

 

 FITC（绿色）、PE（黄色）、PE-Cy5®（橙色）和PE-Cy7®（红色）的吸收和发射光谱显示出清晰的光谱分离，可以对细胞进行四色分析。四种荧光团都被488nm氩激光线（蓝色）有效激发。FITC可以使用FITC过滤器进行可视化。PE可以使用Cy3过滤器进行可视化。PE-Cy5®和PE-Cy7®可以分别使用Cy5和Cy7过滤器进行可视化。

 

 

串联染料使用注意事项：

 

•     · 避免长时间暴露在光照下，串联染料对光非常敏感，应始终避光。

•     · 不要冷冻串联偶联物，这会导致供体变性

•     · 注意，固定和破膜的操作会降低串联染料的亮度

•     · 在用于多色流式细胞术时请使用适当的对照，例如用于背景、未染色细胞的同种型对照和用于补偿的单色对照

•     · 由于这是两个或多个具有重叠发射光谱的串联染料，请在分析数据之前确定是否需要荧光补偿

 

  

藻胆蛋白

 

PE 、APC、PerCP

产品信息

藻红蛋白(PE)的荧光光谱。

别藻蓝蛋白(APC)的荧光光谱